ATCC 人軟骨細(xì)胞（ TC-28a2細(xì)胞）簡介
細(xì)胞名稱 人軟骨細(xì)胞 TC-28a2
QINGBIO 貨號(hào) QZC10385
動(dòng)物種別 人
細(xì)胞數(shù)量 1X10^6
培養(yǎng)瓶規(guī)格 25T
傳代次數(shù) 2-3 代
穩(wěn)定傳代次數(shù) 10-15 代
傳代方式 1：2 或 1：3 傳代
推薦培養(yǎng)方案 90%Hyclone DMEM 高糖培養(yǎng)基；
10% Gibco 胎牛血清、1%-1.5%Cellbio雙抗
培養(yǎng)溫度 37℃
二氧化碳濃度 5%
細(xì)胞純度 ≥99%
支原體檢測 （-）
培養(yǎng)體系內(nèi)毒素檢測 ≤0.5EU/ml
ATCC 人軟骨細(xì)胞（ TC-28a2細(xì)胞）處理注意事項(xiàng)
1、收到細(xì)胞，請?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞。,由于運(yùn)輸過程中的問題，細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細(xì)胞有可能從瓶壁中脫落下來，顯微鏡下觀察會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞懸浮的情況，出現(xiàn)此狀態(tài)時(shí)，請不要打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶，應(yīng)立即將培養(yǎng)瓶置于細(xì)胞培養(yǎng)箱里靜止 3-5 小時(shí)左右，讓細(xì)胞先穩(wěn)定下，再于顯微鏡下觀察，此時(shí)多數(shù)細(xì)胞會(huì)重新貼附于瓶壁。如細(xì)胞仍不能貼壁，請用臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力，如臺(tái)盼藍(lán)染色證實(shí)細(xì)胞活力正常請按懸浮細(xì)胞的方法處理。
2、收到細(xì)胞后，請鏡下觀察細(xì)胞，用恰當(dāng)方式處理細(xì)胞。若懸浮的細(xì)胞較多，請離心收集細(xì)胞，接種到一個(gè)新的培養(yǎng)瓶中。棄掉原液，使用新鮮配制的培養(yǎng)基，使用進(jìn)口胎牛血清. 剛接到細(xì)胞，若細(xì)胞不多時(shí) 血清濃度可以加到 15％去培養(yǎng)。若細(xì)胞迏到 80%左右 ，血清濃度還是在 10％。
3、收到細(xì)胞時(shí)如無異常情況 ，請?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度，如為貼壁細(xì)胞，未超過 80%匯合度時(shí)，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基吸出，留下 5-10ML 培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)：超過 80%匯合度時(shí)，請按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞，吸出培養(yǎng)液，1000 轉(zhuǎn)/分鐘離心 3 分鐘，吸出上清，管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。
4、24 小時(shí)后，細(xì)胞形態(tài)已恢復(fù)并貼滿瓶壁，即可傳代。（貼壁細(xì)胞）將培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)基倒去，加 3-5ml（以能覆蓋細(xì)胞生長面為準(zhǔn)）PBS 或 Hanks’液洗滌后棄去。加0.5-1ml 0.25%含 EDTA 的胰酶消化，消化時(shí)間以具體細(xì)胞為準(zhǔn)，一般 1-3 分鐘，不超過 5 分鐘。可以放入 37℃培養(yǎng)箱消化。輕輕晃動(dòng)瓶壁，見細(xì)胞脫落下來，加入 3-5ml培養(yǎng)基終止消化。用移液管輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞，使之完全脫落，然后將溶液吸入離心管內(nèi)離心 1000rpm/5min。棄上清，視細(xì)胞數(shù)量決定分瓶數(shù)，一般一傳二，如細(xì)胞量多可一傳三，有些細(xì)胞不易傳得過稀，有些生長較快的細(xì)胞則可以多傳幾瓶，以具體細(xì)胞和經(jīng)驗(yàn)為準(zhǔn)。（懸浮細(xì)胞）用移液管輕輕吹打瓶壁，直接將溶液吸入離心管離心即可。
5、貼壁細(xì)胞 ，懸浮細(xì)胞。嚴(yán)格無菌操作。換液時(shí)，換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和換新鮮的培養(yǎng)液培養(yǎng)。
