細(xì)胞在培養(yǎng)瓶長(zhǎng)成致密單層后，已基本上飽和，為使細(xì)胞能繼續(xù)生長(zhǎng)，同時(shí)也將細(xì)胞數(shù)量擴(kuò)大，就必須進(jìn)行傳代,再培養(yǎng)，傳代培養(yǎng)也是一種將細(xì)胞保存下去的方法，同時(shí)也是利用培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)的必經(jīng)過(guò)程，懸浮型細(xì)胞直接分瓶就可以而貼壁細(xì)胞需經(jīng)消化后才能分瓶。

人外根鞘細(xì)胞建立和培養(yǎng)簡(jiǎn)介:

創(chuàng)建的4因子轉(zhuǎn)錄法進(jìn)行細(xì)胞制作，原料為末梢血單核細(xì)胞，采樣簡(jiǎn)單。如使用新鮮單核細(xì)胞，2周后可獲得細(xì)胞克隆體(圖1)，4周內(nèi)便可以制作出初代細(xì)胞(圖2)。在培養(yǎng)方面，使用無(wú)滋養(yǎng)層培養(yǎng)法對(duì)細(xì)胞進(jìn)行增殖培養(yǎng)，可在每周獲得2-3倍的細(xì)胞(圖3，圖4)。在細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后，進(jìn)行免疫染色測(cè)試，對(duì)細(xì)胞的未分化狀態(tài)進(jìn)行確定，分別對(duì)細(xì)胞進(jìn)行膜染色(圖5)及核染色(圖6)，由此得到高質(zhì)量的細(xì)胞。

人外根鞘細(xì)胞主要服務(wù):

1)細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)(有滋養(yǎng)層or無(wú)滋養(yǎng)層)

2)細(xì)胞增殖及冷凍保存

3)基礎(chǔ)培養(yǎng)技術(shù)實(shí)習(xí)

4)新藥及實(shí)驗(yàn)儀器上市前評(píng)估

人外根鞘細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程中，經(jīng)常見(jiàn)到黑色的顆粒或小黑點(diǎn)，這種情況是怎么引起的呢?該怎么避免呢?

原因:黑點(diǎn)，大概有細(xì)胞本身帶的，環(huán)境有的，還有人身上帶進(jìn)細(xì)胞間的,還有就是血清和培養(yǎng)基

1、如果小黑點(diǎn)有增殖趨勢(shì)，那么就有可能是污染了，需要處理;

2、如果小黑點(diǎn)沒(méi)有增殖趨勢(shì)，且不影響細(xì)胞生長(zhǎng)，也不影響實(shí)驗(yàn)的話，則可能

a、是“黑膠蟲(chóng)”，黑膠蟲(chóng)究竟是一種生物還是非生物，本身就存在爭(zhēng)議。有人認(rèn)為是從血清中來(lái)的一種原蟲(chóng)，也有人認(rèn)為是細(xì)菌，或是真菌，也有人認(rèn)為是血清中的蛋白的結(jié)晶。“黑膠蟲(chóng)”可寄生于動(dòng)物細(xì)胞，也可以生存于培養(yǎng)基中，依靠細(xì)胞和培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)為生，并隨人外根鞘細(xì)胞傳代而傳代。“黑膠蟲(chóng)”與細(xì)胞競(jìng)爭(zhēng)性生長(zhǎng)，開(kāi)始時(shí)對(duì)細(xì)胞并沒(méi)有什么影響，但當(dāng)黑膠蟲(chóng)的數(shù)量多到一定程度的時(shí)候，細(xì)胞生長(zhǎng)就會(huì)受到影響直至死亡，嚴(yán)重影響了科研活動(dòng)的開(kāi)展和進(jìn)行。以前(這個(gè)至少是10年以前)，很多實(shí)驗(yàn)室在養(yǎng)細(xì)胞時(shí)用國(guó)產(chǎn)血清，那時(shí)的血清可能質(zhì)量不過(guò)關(guān)，有所謂的“黑膠蟲(chóng)”，但是也沒(méi)有明確的鑒定。但是現(xiàn)在的血清，即使國(guó)產(chǎn)的，產(chǎn)品里這種現(xiàn)象就少見(jiàn)了。

b、是細(xì)胞碎片，或血清里德沉淀析出，在做布朗運(yùn)動(dòng)。

c、是核糖體，也可能是雜質(zhì)

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