MSC細胞準備工作
（1）試管、試管架、滴管、吸管、小鼠固定架、玻璃瓶、玻璃皿、燒杯、橡皮頭、剪刀、鑷子、紗布、棉球、酒精燈、滴管、移液器、細胞計數(shù)器、生理鹽水、PBS、雙抗（青鏈霉素）、75%酒精、95%酒精、培養(yǎng)瓶（50ml，260ml）。
（2）BALB/C小鼠（4~5周齡，18~22g，雌雄不限）、胎牛血清（滅活）、DMEM-LG培養(yǎng)液（美國GIBCO）
（3）針頭與注射器：4.5號、7號針頭（沖小鼠股骨、脛骨和肱骨骨髓，制單細胞懸液）。
MSC細胞實驗前準備
（1）實驗室消毒，隔離衣消毒，小鼠固定架消毒。配10%FBS培養(yǎng)液，加雙抗（內(nèi)含青霉素、鏈霉素各100μg/ml）。
（2）用75% 酒精擦拭無菌操作臺面，取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于超凈臺面，無菌室及超凈臺用紫外燈照射30~60 分鐘滅菌。
（3）開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。穿隔離衣，戴手套。用70% 酒精擦拭無菌操作臺面，并開啟無菌操作臺風(fēng)機運轉(zhuǎn)10 分鐘后，才可開始實驗操作。點燃酒精燈，安裝吸管帽。
MSC細胞實驗步驟
（1）BALB/C純系小鼠脫臼處死后，75%乙醇浸泡5min后，在無菌操作臺上無菌條件下分離雙側(cè)股骨及脛骨，在含生理鹽水的50mm2玻璃平皿中去除股骨周圍肌肉組織，剪去包括骺板在內(nèi)的兩側(cè)骺端，用10ml注射器（配4.5號針頭）抽取適量含10%FBS的完全培養(yǎng)基沖洗骨髓腔，將骨髓沖入培養(yǎng)瓶。依次用7號針頭和4.5號針頭（或依次過21、23、25號）反復(fù)吹打骨髓細胞懸液，制成單細胞懸液。細胞懸液在1000rpm離心5min后收集細胞或進行密度梯度離心。
（2）將單細胞懸液于1:2比例加到含1.082比重Percoll細胞分離液的離心管中，4℃條件下，經(jīng)500g密度梯度離心25min，小心收集離心液界面上乳白色云霧狀的單核細胞層，加入等量無血清培養(yǎng)基或磷酸鹽緩沖液（PBS）充分洗滌（500g離心5min或180g離心10min）2次，去上清，用10%FBS的培養(yǎng)基懸浮細胞（用0.83%氯化胺破碎紅細胞，培養(yǎng)液重懸細胞）。注意：密度梯度離心力500g×30min組優(yōu)于800g×30min。本步驟可以省略。
附：人骨髓：抽取骨髓10-15ml（或正常人手術(shù)肋骨取骨髓3-5ml），每毫升骨髓加100u 肝素抗凝，充分混勻后，保存于4℃冰箱，24小時內(nèi)分離骨髓MNC。骨髓先加入等量 PBS或Hanks液（或培養(yǎng)液）混勻后，以1份淋巴細胞分離液上面加2份稀釋骨髓的比例，將稀釋骨髓緩慢加入ficoll液面上（密度1.077），水平離心機20℃條件下500g（2000r/min）離心25~30分鐘。從界面上取出的MNC用PBS液洗滌2~3次后，加適量培養(yǎng)液計數(shù)。
（3）數(shù)細胞數(shù)量，達到106~107/ml后即進行原代培養(yǎng)，按5×106/ml濃度接種于50ml培養(yǎng)瓶中（1×106/cm2培養(yǎng)瓶），每瓶含5ml L-DMEM完全培養(yǎng)液。在體積分數(shù)為5%的CO2和37℃條件下靜止培養(yǎng)，3d后換液去除非貼壁細胞，以后每3~4d半量換液1次，10~12d細胞達90%融合時傳代。
（4）傳代培養(yǎng)：傳代時先全部吸出培養(yǎng)液后，用無Ca2+ 、Mg2+PBS液洗滌二次，加入37℃預(yù)熱的0.25%（2.5g/L，0.25%）胰蛋白酶（含1mmol/L EDTA，即用1mmol/L-EDTA-Na2配制）消化1~2分鐘，吸去胰酶，以殘留的胰酶繼續(xù)消化，倒置顯微鏡下觀察，細胞開始皺縮時（細胞開始變圓）加入完全培養(yǎng)液（3ml左右）終止胰酶作用。吸管反復(fù)吹打后將細胞收集于15ml離心管中，1500r/min 離心10分鐘后棄上清，再用PBS液洗滌二次徹底洗去混有的胰蛋白酶。
將細胞再懸浮于培養(yǎng)液中，按2~5×105/ml再次接種傳代于新的培養(yǎng)瓶中。當(dāng)這些細胞生長接近融合層時，即得到骨髓MSC。傳至3~5代的MSC按1×105cells/cm2密度接種于放置有蓋玻片的6孔板內(nèi)，以制備細胞爬片。
注：貼壁細胞的消化，應(yīng)掌握各類型細胞不同的消化時間，避免過度消化，損傷細胞活力；或消化不足，不能充分解離成單細胞。如為長期實驗，每個月重新復(fù)蘇一支細胞，避免長期傳代引起細胞特性變異。
合肥星肽生物科技有限公司作為美國ATCC專業(yè)代理商，專業(yè)經(jīng)營ATCC菌種、ATCC原代細胞、培養(yǎng)基、抗體、生物試劑、耗材等，我公司和ATCC共同努力致力于為客戶提供可靠的研究材料以及方便快捷的服務(wù)，對購買項目的前期資料提供,中期合同保證,后期貨物跟蹤到*終售后的確保項目準確到位，都有相關(guān)專業(yè)人士進行維護,確保您在我公司獲得*上等服務(wù)！
公司展臺網(wǎng)址：http://th47.cn
MSC細胞說明書pdf版和相關(guān)資料下載
MSC細胞應(yīng)用舉例
我們的細胞品牌ABM ATCC ScienCell 中科院細胞庫
選擇合肥星肽生物科技有限公司的理由
生產(chǎn)實力雄厚
合肥星肽生物科技有限公司擁有近2000平方米獨立研發(fā)中心以及無菌實驗室4條完善的多肽生產(chǎn)線，單月可交貨3000條多肽精品，生產(chǎn)研發(fā)速度快，可快速相應(yīng)您的需求。
技術(shù)設(shè)備先進
合肥星肽生物科技有限公司實驗室配備了waters LC-MA/MS、waters uplc，waters全自動純化儀、島津LCMS、全自動凍干系統(tǒng)、紫外分光光度計等專用精密儀器，為您提供高效專業(yè)的技術(shù)服務(wù)。
客戶服務(wù)完善
合肥星肽生物科技有限公司廣大客戶提供專業(yè)的前沿產(chǎn)品、合理的價格、便捷的物流服務(wù)，幫助客戶縮短科研周期、節(jié)省試驗成本，使客戶的科學(xué)研究具有持續(xù)性。
關(guān)于合肥星肽生物科技有限公司
合肥星肽生物科技有限公司是一家致力于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域的高科技企業(yè)，公司地址位于科教名城———合肥市。公司主營多肽合成、多肽定制、多肽純化等多肽制備多肽技術(shù)服務(wù)。在合肥市與中科院的關(guān)懷下，2021年初合肥市高新區(qū)與中科院分別與合肥星肽生物科技有限公司簽訂了戰(zhàn)略投資協(xié)議。
公司位于合肥市高新區(qū)安徽中科資城創(chuàng)業(yè)孵化器A區(qū)，擁有2000平方米獨立研發(fā)中心以及無菌實驗室，四條完善的多肽生產(chǎn)線，配備了Waters LC- MS/MS、Waters UPLC、Waters 全自動純化儀、島津LCMS、全自動凍干系統(tǒng)、紫外分光光度計等專用精密儀器保障合肥星肽生物科技有限公司月產(chǎn)3000條精品多肽的生產(chǎn)能力，這些得以讓我們可以為客戶快速準確的提供各種高質(zhì)量的多肽產(chǎn)品及服務(wù)。
合肥合肥星肽生物科技有限公司始終致力于為您的實驗研究提供高品質(zhì)、穩(wěn)定性良好的產(chǎn)品，“做您身邊的多肽合成專家”一直是每個合肥星肽生物科技有限公司人的目標與方向，勵志作為多肽合成行業(yè)標準的風(fēng)向標。公司擁有100余人的專業(yè)團隊，其中博士研究生、碩士研究生10余人。在此基礎(chǔ)上公司配備了一套包含從售前到售后的專業(yè)團隊，力爭做到每個環(huán)節(jié)都“清晰明了”，對每一個問題都“吹毛求疵”，讓您的實驗變得更加簡單，正是憑借這樣的信仰和扎實的多肽合成技術(shù)優(yōu)勢，合肥星肽生物科技有限公司已經(jīng)成為國內(nèi)外高校與眾多生物醫(yī)藥企業(yè)誠信的合作伙伴和堅強的技術(shù)后盾。
公司秉承“專業(yè)鍛造品質(zhì)，服務(wù)打造市場”的經(jīng)營理念，為國內(nèi)廣大客戶提供專業(yè)的前沿產(chǎn)品、合理的價格、便捷的物流服務(wù)。 公司自成立以來，一直致力于多肽合成、多肽定制、多肽純化等多肽制備多肽技術(shù)服務(wù)的研究。幫助客戶縮短科研周期、節(jié)省試驗成本，使客戶的科學(xué)研究具有持續(xù)性。 實驗室配備一支年輕、專業(yè)、富有創(chuàng)造精神且經(jīng)驗豐富的技術(shù)團隊。
合肥星肽生物科技有限公司目前跟國內(nèi)外企業(yè)有著友好的合作往來。斯坦福大學(xué)，牛津大學(xué)，北京大學(xué)，清華大學(xué)，天津大學(xué)，浙江大學(xué)，中科大，香港理工大學(xué)，以及中科院遺傳所，過程所，化學(xué)所，生物細胞所，微生物所等，北京軍科院**醫(yī)學(xué)研究所，武漢病毒研究所等有穩(wěn)定合作。
訂購信息
郵箱：
|
info@synthbio.cn
|
|
座機：
|
0551-68788198
|
|
手機：
|
13295518198
|
QQ：
|
3520600998
|
|
微信：
|
13295518198
|
|
在線溝通：
|
點擊溝通
|
