Immortalized Human Esophageal Epithelial Cells (NE2-hTERT) T0632

永生化人食管上皮細(xì)胞（NE2-hTERT） 上海 安徽 合肥 ABM細(xì)胞庫(kù)

15000元  貨期2周

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BioSafety Level	II
Organism	Homo sapiens
Source Organ	Esophageal mucosa
Donor Age	52
Donor Gender	Male
Growth Properties	Adherent
Morphology	Epithelial-like
Recommended Seeding Density	Thaw entire contents into an appropriate T25 flask as specified in the Propagation instructions.
Markers	CK5, CK6, CK8, CK13, Ck18, CK19
Applications	For Research Use Only
Immortalization Method	Serial passaging and transduction with retroviruses carrying hTERT gene
Description	The Immortalized Human Esophageal Epithelial Cells (NE2-hTERT) retains epithelial morphology and can be used as a reliable supply of normal esophageal epithelial cells. The cells expresses cytokeratins 5, 6, 8, 13, 18, and 19. Whereas 6 and 18 are markers for proliferating epithelial cells while 8, 13, 18, and 19 are markers for esophageal squamous cells respectively. NE2-hTERT cells do not grow anchorage-independently and are not tumorigenic. It is recommended for applications in studies of esophageal epithelial cell functions and development of esophageal cancer.
Procedure Overview
Image
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Propagation	The complete media for this cell line is 1:1 ratio of Defined Keratinocyte-SFM (DKSFM) with supplements (Gibco, #10744-019) and Epilife medium with EDGS (CAS:cade Biologics #M-EPI-500-CA; #S-012-5) . Atmosphere: air: 95%, CO?: 5%; Temperature: 37.0°C.
Subculturing	To subculture from T-25 (1:3): 1. Remove media and wash with 2 m 1X PBS 2. Add 0.5 ml Trypsin-EDTA (TM050) (abm TM050) 3. Put flask into 37°C incubator for ~2 minutes or until cells detach 4. Neutralize using 3 ml of DKSFM supplemented with 2% FBS 5.Transfer cells to 15 ml tube and centrifuge at 700 rpm for 4 minutes at room temperature 6. Remove supernatant 7. Add 2 ml complete media to each flask 8. Resuspend cells with 1.5 ml complete medium 9. Add 0.5 ml resuspension into each flask containing 2 ml complete medium 10. Incubate in 37°C incubator with 5% CO? overnight 11. Next day remove media, and add 5 ml of complete media to each flask Be sure to use T25 ECM-coated flasks(G299) for growth.
Preservation	To freeze down from T-25 (1:2): 1. Remove media and wash with 2 m 1X PBS 2. Add 0.5 ml Trypsin-EDTA (abm TM050) 3. Put flask into 37°C incubator for ~2 minutes or until cells detach 4. Neutralize using 3 ml of DKSFM supplemented with 2% FBS 5. Transfer cells to 15 ml tube and centrifuge at 700 rpm for 4 minutes at room temperature 6. Remove supernatant 7. Add 2 ml complete media to each flask 8. Resuspend cells with 1 ml complete medium 9. Add 1ml of freezing medium (TM024) 10. Transfer 1 ml aliquot into each cryopreservation vial, and freeze 11. Transfer to liquid nitrogen tank the next day for long term storage
Quality Control	1) Immunostaining and Western blot were preformed for cell characterization
Disclaimer
聯(lián)系方式	何經(jīng)理，合肥星肽生物科技有限公司，Tel：0551-63802898      400-8702-898，                                                  E-mail：info@qingbio.com      http://th47.cn      QQ:514713116

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