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PCR
技術(shù)支持

DNA實驗技術(shù)：哺乳動物中制備基因組DNA實驗

標(biāo)簽： 哺乳動物 基因 DNA

在DNA提取過程中應(yīng)盡量避免使DNA斷裂和降解的各種因素，以保證DNA的完整性，為后續(xù)的實驗打下基礎(chǔ)。一般真核細(xì)胞基因組DNA有107-9bp，可以從新鮮組織、培養(yǎng)細(xì)胞或低溫保存的組織細(xì)胞中提取，常是采用在EDTA以及SDS等試劑存在下用蛋白酶K消化細(xì)胞，隨后用酚抽提而實現(xiàn)的。

實驗方法
  • 制備DNA
實驗材料
試劑、試劑盒
儀器、耗材
實驗步驟
1.  切下組織并立即剪成小塊，置于液氮中凍結(jié)。
 
2.  將200 mg~1 g 的組織用預(yù)冷的研缽和研杵研碎，或用錘子將其搗為細(xì)粉末，每100 mg 組織用1. 2 ml 消化緩沖液懸浮。
 
3.  500 g 離心細(xì)胞5 min，棄上請。貼壁生長細(xì)胞先用胰酶消化。
4.  細(xì)胞用1~10 ml 冰冷的PBS重懸，500 g 離心5 min，棄上清，重復(fù)1次。
5.  用1體積 的消化緩沖液重懸細(xì)胞。
 
6.  將樣品在蓋緊的管中于50℃搖蕩下溫育12~18 h。
 
7.  用等體積的酚/氯仿/異戊酵抽提樣品，1 700 g 離心10 min。
8.  如果樣品溶解得不好， 再加1體積不含蛋白酹K的消化緩沖液，并重復(fù)離心。
9  如果在界面上有一層厚的白色物質(zhì)，重復(fù)有機(jī)抽提，將上層（水溶液）轉(zhuǎn)移至一個新管中。
 
10.  加入1/2體積7.5 ml 乙酸銨和2體積100%乙醉，1 700 g 離心2 min。
 

11.  用70%乙酵洗滌，晾干，沉淀用TE。

12.  緩沖液重新溶解，使終濃度在約1 mg/ml 左右

                                                              合肥合肥星肽生物科技有限公司

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